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Production d'anticorps à façon
LES DIFFERENTES ETAPES
Ce projet comprend plusieurs étapes clés nécessaires à la réalisation des anticorps monoclonaux.
Depuis novembre 2016, notre laboratoire est certifié ISO 9001:2015. Cette certification démontre notre engagement à fournir à nos clients une prestation de qualité et à faire reconnaître nos compétences au niveau international.
01
Immunisations et contrôle de la réponse immunitaire
Quatre souris BALB/c seront immunisées et le nombre d'injections dépendra de la réponse immunitaire des animaux (une saignée intermédiaire sera réalisée après la 4eme injection). Il est à noter que nous disposons d'un adjuvant permettant l'obtention d'une réponse immunitaire forte.
02
Fusion cellulaire et production des hybridomes
La fusion cellulaire sera réalisée entre les splénocytes immuns et des myélomes de lignée Sp2/0-Ag 14 en utilisant du polyéthylène glycol.
La sélection des hybridomes sera réalisée en milieu sélectif HAT.
03
Criblage des hybridomes
Pour réaliser le criblage des hybridomes par test ELISA, le laboratoire demandeur devra fournir suffisamment d'antigènes. Dix plaques ELISA seront utilisées. Pour un meilleur criblage, un test ELISA triple sandwich est recommandé. Pour cela, le laboratoire demandeur devra éventuellement fournir un anticorps polyclonal de lapin (ou autre) dirigé contre l'agent pathogène.
04
Clonage et caractérisation
L'obtention des anticorps monoclonaux sera réalisée à partir des cultures d'hybridomes secrétant des anticorps spécifiques. Deux ou trois dilutions limites seront nécessaires pour s'assurer de la monoclonalité de la culture cellulaire. L'isotypage des anticorps monoclonaux sera également effectué.
05
Production des anticorps monoclonaux
Les hybridomes spécifiques seront multipliés puis congelés dans l'azote liquide afin de préserver les lignées cellulaires.
Normalement, les anticorps monoclonaux seront produits par culture in vitro des hybridomes (récupération des surnageants de culture); concentration moyenne estimée d'anticorps : 5-20 µg/ml
L'entretien des hybridomes et la production d'anticorps en masse feront l'objet d'un contrat particulier, le cas échéant.
06
Purification des anticorps & couplage enzymatique
Les anticorps monoclonaux de type IgG peuvent être purifiés sur colonne de chromatographie d'affinité en utilisant la protéine G. Les anticorps d'isotype différent (IgM par exemple) peuvent être purifiés en utilisant d'autres méthodes.
Selon les besoins du laboratoire demandeur, les anticorps monoclonaux purifiés pourront être couplés soit à la biotine, soit à la phosphatase alcaline, soit à la peroxydase. La réactivité des anticorps couplés sera testée en utilisant un test ELISA.
07
Calibration du test ELISA
L'efficacité d'une méthode de détection dépend principalement de trois facteurs : la sensibilité de la technique, le degré de spécificité de la détection et des conditions d'utilisation en pratique. Ces trois facteurs sont pris en compte afin d'élaborer un test ELISA fiable adapté aux analyses de routine.
08
Validation des réactifs
La mise au point d'un test ELISA de référence nécessite la validation de ces outils, éventuellement sur plusieurs souches d'antigènes d'origines différentes, provenant de plusieurs pays. Les réactifs retenus seront ceux qui présenteront le spectre de détection le plus étendu.
Calendrier et délais
- Le démarrage de la prestation pourra intervenir dans un délai d’une quinzaine de jours à compter de la signature du contrat.
- La durée globale de l’intervention est fixée entre 3 et 6 mois à compter de la réception de l’accord définitif.
- Le respect de ce calendrier dépend des contraintes indépendantes de notre volonté et, en particulier, celles qui sont liées au pouvoir immunogène de l’antigène.
Clauses de confidentialité
Nous nous engageons à garder confidentielles toutes les informations relatives à nos clients si elles n’ont pas été explicitement reconnues comme non confidentielles.
SEDIAG et les membres de l’équipe impliqués dans ce projet sont soumis au secret professionnel et s’engagent à respecter les clauses de confidentialités liées à l’exécution de leur mission.